实验原理
正常肝糖原的含量约占肝重的5%。许多因素可影响肝糖原的含量,入饮食、饥饿、糖皮质激素及肾上腺素等。
糖原在浓酸中可水解为葡萄糖,浓硫酸能使后者进一步脱水生成糖醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛。此化合物再和蒽酮作用生成蓝色化合物,与用同法处理的标准葡萄糖溶液比色,即可推算出糖原含量。糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前肝组织先放在浓碱中加热,破坏其他成分,而保留肝糖原。
实验方法
1.肝糖原的提取:取体重在25g以上的健康小白鼠1只,断头处死,剖腹取出肝脏,用生理盐水冲洗后,再用滤纸吸干水分,准确称取肝组织0.5g,放入盛有30% KOH溶液1.5ml的试管中,置沸水浴煮20分钟(肝组织必须全部溶解,否则影响比色),取出后冷却,将试管内容物全部移入100ml的容量瓶(用蒸馏水多次洗涤试管,一并收入容量瓶内),加蒸馏水至刻度,仔细混匀。
2.糖原的测定:取干净试管3支,编号后按表1-6加样,混匀后,置于废水浴中10分钟,冷却后选用620nm的单光色,用空白管调零,测定2.3管的吸光度。
表1-6
3.计算:
注意事项
1.此法测定值在肝糖原含量为1.5-9%之间。若肝糖原小于1%时,由于蛋白质的干扰测定结果不准确,须改用间接法测定,即在肝组织消化后用95%乙醇沉淀肝糖原(1:1.25),离心分离,用蒸馏水2ml溶解肝糖原,再按1-6表操作。
2.公式中的1.11为此法测得葡萄糖含量换算成糖原含量的常数,即100μg葡萄糖用蒽酮试剂显色相当于111μg糖原用蒽酮试剂所显之色。