原理
采用竞争酶联免疫分析法测定，在微量反应板上预先包被二抗，它能特异地结合抗BNP抗体（一抗）的Fc片段，样品或标准孔中的BNP与试剂中的生物素标记的BNP竞争结合一抗的Fab片段。结合有生物素的复合物再与辣根过氧化物酶标记的链亲和素结合，通过洗涤除去游离的生物素标记的脑钠肽及链亲和素-辣根过氧化物酶结合物。酶催化四甲基苯胺（TMB）底物显色，颜色深浅与标本中的脑钠肽（BNP）含量呈负相关。根据校正曲线，求得样品中BNP的浓度。
20×浓缩缓冲液（50ml）
包被有二抗的微量反应板（96孔）
封板胶（3张）
一抗（兔抗人BNP IgG）
BNP标准液（1μg）
生物素标记人BNP段
链亲和素-辣根过氧化物酶结合物（SA-HRP 30μl）
底物液（TMB 12ml）
终止液（2 mol/L 盐酸15ml）
操作步骤
试剂准备
1、稀释缓冲液：用950ml蒸馏水稀释50ml的浓缩缓冲液。
2、将脑钠肽标准液用1ml稀释缓冲液溶解，BNP浓度则为1000μg/l。用稀释缓冲液稀释成下列浓度：0.01、0.1、1、10、100μg/l。
3、分别用5ml稀释缓冲液溶解一抗、生物素标记人BNP肽段，摇匀。
4、取链亲和素-辣根过氧化物酶结合物（SA-HRP）12μl加入到12ml稀释缓冲液中，摇匀（用前稀释）。
操作
在96孔微量反应板上，设A1为空白对照，B1为总结合孔，C1到G1加系列标准品，其余孔加待测定血清样品。
| 加入物（μl） | 空白孔 | 各标准孔 | 样品孔 |
|---|---|---|---|
| 标准品 | — | 50 | — |
| 待测样品 | — | — | 50 |
| 一抗 | — | 25 | 25 |
生物素标记人BNP | — | 25 | 25 |
| 封板，室温孵育2h后，洗板6次 | |||
| SA-HRP | — | 100 | 100 |
| 封板，室温孵育2h后，洗板6次 | |||
| 底物液 | 100 | 100 | 100 |
| 封板，室温下孵育1h | |||
| 终止液 | 100 | 100 | 100 |
混匀，用酶标仪在450nm波长处比色，用空白对照孔调零，测定各孔吸光度。
计算
在半对数坐标纸上，以标准品浓度的对数值为横坐标，各标准品相应的吸光度为纵坐标，绘制半对数坐标校正曲线。由校正曲线求得样品的浓度（μg/l）。
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