实验原理
以抗细胞因子单抗包被酶联板，与标本中相应的细胞因子特异性反应，然后加入生物素抗生物素放大的酶标抗细胞因子抗体，再经酶底物显色，颜色深浅表示细胞因子量的多少。
elisa试剂盒与器材
抗细胞因子单抗
生物素1抗细胞因子抗体
抗生物素-酶
细胞因子标准品
底物（OPD或TMB）
终止液（2N硫酸）
96微孔板
稀释液和洗涤液
包被缓冲液（0.05mol/L，pH9.6的碳酸盐缓冲液）
酶标仪
操作步骤
1、用包被缓冲液稀释抗细胞因子单抗，浓度为10μg/ml，包被96孔板，每孔加100μl，4℃包被过夜，次日用洗液洗包被板3次。
2、每孔加1%BSA-PBS封闭液200μl，室温封闭2h，用洗液洗3次。
3、标准曲线的建立：标准品用样品稀释液倍比稀释，范围为1000；500；250；125；62.5；31.25；15.6（pg/ml），每孔加100μl，每一稀释度须做双复孔。标准品通常储存在-30℃或冷冻干燥后4℃保存，溶解后须一次用完。
4、检测标本可作适当稀释，每孔加入100μl，每一样本建议做双复孔。同时设正常对照和空白对照。
5、37℃孵育1h或室温孵育2h，然后洗板3-5次。
6、每孔加生物素-抗细胞因子抗体100μl，37℃孵育1h或室温孵育2h，然后洗板3-5次。
7、每孔加抗生物素-酶100μl，37℃孵育30min，然后洗板3-5次。
8、每孔加底物100μl，37℃避光孵育20min。
9、每孔加终止液50μl，酶标仪读取A492值（OPD）或A450（TMB）。
注意事项
一、标本的采取和保存
1、血清标本应避免严重溶血，否则可能会增加非特异性显色。
2、血清应避免细菌污染，否则会因菌体中的内源性HRP而产生假阳性反应。
3、许晴如浑浊或沉淀应离心沉淀后取上清检测。
4、标本宜在新鲜时检测。若5d内检测，可使用冰箱2-8℃保存，超过一周时间测定，应于-20℃低温冻存。样本的长时间保存应在-70℃以下。
二、elisa试剂盒准备
从冰箱中取出elisa试剂盒，等待温度与室温平衡后在使用。否则可能会造成后面温育时间不够，其直接的后果是一些弱阳性标本出现假阳性。
三、加样及反应试剂：
加样不可太快，要避免加在孔壁上部，不可溅出和产生气泡。
四、孵育
孵育是elisa测定中影响测定成败最为关键的一个因素。常用的孵育温度和时间有37℃ 1-2h和4℃过夜。较高的孵育温度下，反应时间可缩短，但对分子含量少的弱阳性标本有漏检的可能。因此，建议elisa检测时尽量使用较低温度孵育较长时间。如果需要使用较高孵育温度，尽量采用水浴，孵育时让酶标板浮于水面上，或将浸透水的纱布置于饭盒中使成一湿盒，放于温箱中。
五、洗板
每次孵育后洗板是否彻底，与特异背景显色有很大的关系，所以洗板一定要认真仔细。
六、显色
加入底物A液和B液前应分别混匀，弃去第一滴，加入后应振荡混匀。
1、显色剂尽量在临用前配制，坚持不用过期显色剂。
2、加显色剂时应避免其外流。
3、A、B液应避免接触金属器械。
4、在加入底物开始显色反应前，最好是先检查一下底物溶液的有效性，即可将A和B两种液各加一滴于清洁的空板孔或Eppendorf管中，观察是否有显色反应，如有，则说明底物已变质。
七、读板
1、读板时应保证酶标板清洁。
2、读板时，一定要注意酶标仪是否已调至合适波长。
3、如有条件，建议尽量采用双波长比色，这样可排除有酶标板本身、板孔内标本的非特异吸收、指纹、刮痕、灰尘等对特异显色测定吸光度的影响。