Elisa试剂盒中用ELISA检测时(以检测弓浆虫IgM为例),用无特异抗体的血清稀释阳性血清绘制标准曲线,选择的稀释度应很容易区别阳性和阴影结果的稀释度。每次试验均应同时使用阴性对照血清,可选择强阳性的血清作为标准对照血清,并可自己设定其为100单位(免疫酶单位-EIU)。这样每次试验均参考阳性血清结果确定每份血清的相对抗体水平,其计算公式如下:标本值-阴性对照值 阳性对照值-阴性对照值
抗体水平(样本)=(标准值-阴性对照值)/(阳性对照值-阴性对照值)×100%EIU
用在450nm检测的吸光度计算,最后的值为EIU。
如果国内或国际上的标准抗体和检测方法,那么所用的参考血清应与标准血清对照实验进行标准化,但如果所用的检测方法不同,标准化时就存在差别,不同的方法检测出的结果不能反映出参考血清和标准血清之间的差别。
自己制备的标准参考血清应保证质量,并要有足够的血清,小量分装存储与-20℃,或冻干存储。标准血清检测的吸光度值应保证在一定范围内,以便检测每次试验的吸光度值的变化。