酶联免疫诊断技术的发展
酶联免疫吸附诊断技术是以酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)为基础的测定技术。由于抗体可以高度特异与抗原分子结合,因此通过抗原-抗体的特异性识别反应来进行检测就可以成为一种简便的检测程序。
酶联免疫吸附试验,创始于1971年,当时,瑞典学者Engvail和Perlmannn,荷兰学者Van Weerman和Schuurs分别报道将免疫技术发展为检测体液中微量物质的固相免疫测定方法,称为酶联免疫吸附试验。1974年Voller等又将固相支持物改为聚苯乙烯微量反应板,使ELISA技术得以推广应用。ELISA是免疫测定技术中应用最广,最有发展前途的一种技术,可用于测定抗原,也可用于测定抗体。
最初发展的免疫酶测定方法,是使酶与抗体或抗原结合,用以检查组织中相应的抗原或抗体的存在。后来发展为将抗原或抗体吸附于固相载体,在载体上进行免疫酶染色,底物显色后用肉眼或分光光度计判定结果。
酶联免疫测定方法及原理
酶免疫测定方法的基本原理是:先将已知的抗体或抗原结合在某种固形载体上,并保持其免疫活性。测定时,将待检标本和酶标抗原或抗体按不同步骤与固相载体表面吸附的抗原或抗体发生反应。用洗涤的方法分离抗原抗体复合物和游离成分。然后加入底物显色,根据颜色深浅进行定性或定量测定。
自1971年酶联免疫吸附测定技术建立以来,其技术已经日趋成熟,最经典的当属Clark和Adams于1977年建立的双抗原夹心法。后来人们又建立了许多改进的方法,成功地用于病毒的检测与鉴定。根据检测目的和操作步骤的不同,常用的酶联免疫吸附测定方法有两种类型。用于测定抗原的技术类型有双抗体夹心法、双位点一步法和竞争法;用于测定抗体的技术类型有间接法、双抗原夹心法和竞争法。此外,还有捕获法。